牛催乳素相关蛋白Ⅰ(PRPⅠ)的原核表达及生物信息学分析

作者：宋胜男; 郭嘉; 杨亚军; 张辉; **^*; 陈创夫^*

来源：黑龙江畜牧兽医, 2021, (12): 28-150.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2020.08.0206

• 催乳素相关蛋白Ⅰ
• 原核表达
• Western-blot
• 信号肽
• 跨膜结构
• 糖基化

为了获得高纯度的牛催乳素相关蛋白Ⅰ(PRPⅠ),并对其进行生物信息学分析,试验通过PCR扩增中国荷斯坦奶牛PRPⅠ基因,将其与表达载体pET-32a连接后转化至大肠杆菌BL21(DE3)中表达蛋白,通过SDS-PAGE和Western-blot鉴定表达及纯化后的目的蛋白,采用生物信息学方法预测并分析PRPⅠ蛋白的结构、翻译后修饰以及蛋白功能。结果表明:成功克隆到PRPⅠ基因,大小为606 bp;通过SDS-PAGE和Western-blot鉴定后获得高纯度的PRPⅠ蛋白,大小为37 ku。PRPⅠ蛋白N端含有36个氨基酸组成的信号肽序列,无跨膜结构;有3个N连接糖基化修饰和11个抗原表位;由α-螺旋(57.56%)、无规则卷曲(34.87%)、β-折叠(5.46%)、延伸链(2.10%)组成;催乳素受体(PRLR)、生长激素1(GH1)、生长激素受体(GHR)、牛SH2B衔接蛋白1(SH2B1)、未表征的蛋白质(GHE4)、牛绒毛膜促生长激素2(GSH2)、胎盘催乳素相关蛋白Ⅳ(PRPⅣ)、胎盘催乳素相关蛋白Ⅵ(PRPⅥ)、胎盘催乳素相关蛋白Ⅱ(PRPⅡ)、胎盘催乳素相关蛋白Ⅲ(PRPⅢ)与PRPⅠ蛋白有相互作用。说明PRPⅠ蛋白参与了信号分子活性的调节、细胞因子介导的信号通路以及细胞对有机物和激素的反应等生物过程。

• 单位
  新疆生产建设兵团; 石河子大学; 动物科技学院