构建大鼠白细胞介素1β基因shRNA腺病毒载体

作者：赵晓龙; 陈建平; 张宇; 李航; 刘艳芳; 高文燕; 韩磊; 邓亚南

来源：中国组织工程研究, 2015, 19(18): 2923-2927.

• 疼痛
• 白细胞介素1β
• RNA干扰
• 实验动物
• 基因病毒载体及相关因子模型
• 神经病理性疼痛
• 基因表达
• 小干扰RNA
• 短发卡RNA
• 腺病毒载体
• 载体质粒
• HEK293细胞
• 大鼠H9C2细胞
• 山西省自然科学基金

背景:特异性下调白细胞介素1β蛋白的表达可以有效缓解外周神经损伤后病理性疼痛。与si RNA相比,shR NA可以更加稳定、高效地抑制目的基因的表达,但是单纯的shR NA无法高效地进入靶细胞中发挥对目的基因的下调作用,而腺病毒载体具有宿主范围广、感染效率高以及能够在宿主细胞中稳定表达等特点。目的:构建大鼠白细胞介素1β基因的shR NA腺病毒载体并检测其对目的基因表达的影响。方法:根据NCBI查询获得的大鼠白细胞介素1β基因序列设计3条siR NA并合成相应的shR NA,分别为shR NA1、shR NA2、shR NA3。采用3’和5’单链退火得到的sh RNA片段与经过BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切的pH BAd/U6/GFP干扰载体连接,构建白细胞介素1βshR NA腺病毒载体穿梭质粒。测序后将穿梭质粒与骨架质粒共转染HEK293细胞,进行白细胞介素1β基因的shR NA腺病毒载体(rA d/shR NAs)的包装与扩增,分别为rA d/shR NA1、rA d/shR NA2、rA d/shR NA3。将r Ad/shR NAs感染大鼠H9C2细胞,使用荧光显微镜观察其感染效率,采用Western Blot检测r Ad/sh RNAs对目的基因表达的影响。结果与结论:测序结果显示白细胞介素1β基因的3条sh RNA腺病毒载体穿梭质粒中的序列分别与所设计的3条sh RNA序列相同;并成功构建了大鼠白细胞介素1β基因的shR NA腺病毒载体(r Ad/sh RNA1、rA d/shR NA2、rA d/sh RNA3)。rA d/shR NA1、rA d/sh RNA2、r Ad/shR NA3均可以下调白细胞介素1β的表达,其中r Ad/shR NA2的下调效果最明显。

• 单位
  山西医科大学; 山西医学科学院山西大医院