hVEGF_(121)基因真核表达载体的构建及其在神经干细胞中的表达

作者：张猛; 邓娟; 李静; 王延江; 周华东

来源：第三军医大学学报, 2011, 33(01): 36-39.

DOI：10.16016/j.1000-5404.2011.01.007

• 人血管内皮生长因子基因
• 真核表达载体
• 神经干细胞
• 绿色荧光蛋白

目的构建真核表达载体pEGFP-N1/hVEGF121,并转染神经干细胞(neural stem cells,NSCs),以探究人血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,hVEGF121)基因导入NSCs的表达变化。方法分离培养胎鼠NSCs,并行nestin、GFAP免疫染色鉴定。采用PCR法,以hVEGF121质粒为模板,扩增hVEGF121全长编码序列,克隆入载体pMD18-T,随后又将其亚克隆入pEGFP-N1载体中,构建其真核表达载体pEGFP-N1/hVEGF121,并以Fugene 6介导转染,将hVEGF121导入NSCs。倒置显微镜检测转染后的NSCs生长变化及hVEGF121在其中的表达等情况。图像分析技术计算转染效率。RT-PCR法对hVEGF121转染的NSCs进行鉴定。结果成功分离培养到NSCs,并予以鉴定。构建了hVEGF121的真核表达载体pEGFP-N1/hVEGF121,成功地将hVEGF121转染NSCs,其转染效率约50%。被转NSCs生长良好。转染hVEGF121基因的NSCs被诱导分化后,神经球的轴突和轴丘表达神经元标志物NF-200。结论成功地将hVEGF121克隆到pEGFP-N1载体中,并实现了hVEGF121基因在NSCs的表达。

• 单位
  神经内科