人内源性博尔纳样核蛋白-1的原核表达及纯化

作者：吴迪; 金戈; 刘钊; 张亮; 黄荣忠; 杨德雨; 谢鹏

来源：中国生物制品学杂志, 2014, 27(02): 172-176.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.000095

• 人内源性博尔纳样核蛋白-1
• 原核细胞
• 基因表达
• 纯化

目的原核表达人内源性博尔纳样核蛋白-1(endogenous Borna-like N element-1,EBLN-1),并进行纯化及鉴定。方法以人工合成的EBLN-1基因为模板,PCR扩增EBLN-1基因,克隆至载体pET-41a中,构建重组表达质粒pET-41aEBLN-1,转化大肠埃希菌BL21(DE3)和Rosetta中,分别于18℃和37℃下进行IPTG诱导表达。采用包涵体稀释复性法对表达蛋白进行复性,经His亲和层析纯化后,SDS-GAGE和Western blot法鉴定纯化产物。结果重组表达质粒pET-41a-EBLN-1经菌落PCR及测序鉴定构建正确。重组表达蛋白相对分子质量约48 000,以包涵体形式表达。在大肠埃希菌Rosetta中37℃诱导时表达量最高,占菌体总蛋白的30%以上,纯化后蛋白纯度可达90%,可与HRP标记的His探针特异性结合。结论成功表达并纯化了重组EBLN-1蛋白,为后续深入研究EBLN-1在人体中的生理作用及其与精神疾病的相关性奠定了基础。

• 单位
  重庆医科大学附属第一医院; 神经内科; 重庆医科大学