CRISPR系统特异性敲除目的基因在肝病小鼠模型中的应用

作者：马月; 莫丽; 方杰; 张欢欢; 余陈欢

来源：国际流行病学传染病学杂志, 2017, 44(03): 151-155.

• 质粒
• CRISPR技术
• 腺相关病毒系统
• 水动力注射技术

目的利用腺相关病毒(AAV)转导和CRISPR技术建立肝脏相关疾病小鼠模型。方法 AAV-绿色荧光蛋白(GFP)表达系统(AAV-GFP)和CRISPR靶向基因敲除质粒系统(px330-sgGFP-Cas9),三组FVB/NJ小鼠采用尾静脉高压水动力注射技术分别注射生理盐水(对照组)、AAV-GFP(AAV-GFP组)、AAV-GFP+px330-sgGFP-Cas9(sgGFP组),采用小动物活体成像仪检测小鼠肝脏GFP表达情况。结果生理盐水对照组小鼠肝脏不表达GFP;AAV-GFP组小鼠肝脏72 h后开始表达GFP,2周后GFP表达稳定;sgGFP组在第9、12天均表达GFP蛋白,但2周后GFP蛋白明显减弱。结论本研究所构建的AAV-GFP表达系统能够在小鼠肝脏中稳定表达GFP。所构建的CRISPR质粒系统可以特异性敲除小鼠肝脏所携带的目的基因,建立合适的肝脏疾病研究模型。

• 单位
  浙江省医学科学院; 浙江省中医药大学