抗GD2单链抗体-IL-2融合蛋白基因的构建及表达

作者：倪剑锋; 纪剑飞; 吕安国; 黄日波; 韦宇拓; 吴文芳

来源：生物医学工程学杂志, 2007, (01): 170-175.

• 神经节苷脂GD2
• 单链抗体
• 白细胞介素2
• 融合蛋白 GD2 disialoganglioside Single chain antibody(ScFv) Interleukin2 Fusion protein

将已经突变了稀有密码子的人IL-2(Ala125)基因,与GD2单链抗体基因通过over-lap-PCR法,构建成ScFv-IL-2融合基因,并在基因的C端引入his tag序列。ScFv-IL-2基因经测序正确后连接到表达载体pSE380上,然后导入大肠杆菌BL21中表达。表达蛋白为包涵体,表达量占总蛋白的30%以上,经SDS-PAGE及Western blot鉴定表达蛋白的分子量为43 kD,与预期的相符。包涵体粗提后,经Ni2+亲和层析柱及Sephacryl S-200HR柱分离复性,纯度可达90%以上,ELISA试验结果证明该融合蛋白保存了与相应抗原的结合活性和IL-2的生物活性。

• 单位
  中国科学院沈阳应用生态研究所; City of Hope National Medical Center; City of hope National Medical Center; 中国科学院研究生院; 广西大学