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摘要
目的集落刺激因子-1受体(colony-stimulating factor-1receptor,CSF-1R)在鼻咽癌放疗抵抗型患者组织中表达明显高于放疗敏感型患者,体外实验证实其通过PI3K/AKT途径可以促进鼻咽癌细胞6-10B的增殖、迁移和侵袭。本实验探讨CSF-1R对人鼻咽癌6-10B细胞系裸鼠移植瘤生长的影响,并分别从增殖、凋亡和自噬等方面研究其可能的机制。方法建立人鼻咽癌裸鼠异体移植瘤模型,体外利用慢病毒构建的CSF-1R过表达载体LV-CSF1R(16957-1)转染到人鼻咽癌6-10B细胞为实验组(5只),以空载体慢病毒转染6-10B细胞为阴性对照组(5只),不做处理6-10B细胞为空白对照组(5只)。观察并记录裸鼠成瘤情况,剥离瘤体后测定肿瘤体积和质量。用HE染色、免疫组化法、实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)法和蛋白质印迹法等检测移植瘤中CSF-1R基因、增殖相关基因、凋亡相关基因及自噬相关基因的表达。结果 HE染色和免疫组织化学显示实验组过表达CSF-1R。实验组瘤体平均体积为(1 071.747±214.399)mm3,大于阴性对照组(297.943±86.802)mm3和空白对照组(96.152±40.749)mm3,差异有统计学意义,F=72.119,P<0.001;实验组、阴性对照组和空白对照组瘤体平均质量分别为(2.406±0.348)、(0.432±0.156)和(0.17±0.111)g,差异有统计学意义,F=141.852,P<0.001。qRT-PCR法检测显示,实验组CSF-1R mRNA相对表达量为6.161±0.319,高于阴性对照组0.119±0.100和空白组0.076±0.044,差异有统计学意义,F=970.046,P<0.001;实验组CSF-1R蛋白表达量为1.711±0.201,高于阴性对照组0.025±0.009和空白对照组0.023±0.009,差异有统计学意义,F=210.049,P=0.013。空白对照组、阴性对照组和实验组Cyclin D1表达量分别为0.748±0.163、0.778±0.150和1.253±0.123,F=11.269,P=0.009;实验组MMP2表达量为1.080±0.051,高于空白对照组0.067±0.012和阴性对照组0.422±0.056,F=404.710,P<0.001;空白对照组与阴性对照组Bax分别为0.842±0.124和0.703±0.068,实验组为0.361±0.093,F=19.210,P=0.002;空白对照组Bcl-2为0.013±0.006,阴性对照组为0.034±0.016,实验组为0.911±0.141,F=117.257,P<0.001。空白对照组、阴性对照组和实验组Beclin1表达量分别为0.268±0.013、0.322±0.056和0.582±0.035,F=55.480,P<0.001;3组p62相对表达量分别0.822±0.151、0.771±0.108和0.406±0.094,F=10.673,P=0.011;3组LC3Ⅰ/LC3Ⅱ分别为8.343±0.342、4.221±0.574和1.935±0.318,F=173.304,P<0.001。实验组PI3K表达增加为1.100±0.096,空白对照组为0.068±0.016,阴性对照组为0.075±0.020,F=320.004,P<0.001;空白对照组AKT为0.505±0.052,阴性对照组为0.613±0.146,均低于转染组0.948±0.011,F=19.836,P=0.002;空白对照组磷酸化p-AKT为0.242±0.106,阴性对照组为0.530±0.026,同样低于实验组0.960±0.056,F=78.401,P<0.001;3组mTOR蛋白质相对表达量分别为0.620±0.073、0.631±0.061和0.842±0.058,F=11.333,P=0.009。结论 CSF-1R过表达可促进鼻咽癌6-10B裸鼠移植瘤的生长,并可在体内促进细胞增殖、抑制凋亡和诱导自噬,其机制可能与PI3K/Akt通路的激活有关。
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