小反刍兽疫疫苗病毒含量荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

作者：吉哈利; 于子淇; 包玉花; 洛松西热; 索朗拉吉; 周海娟; 旦增卓玛; 王玉恒^*

来源：中国兽医科学, 2023, 53(09): 1108-1114.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2023.0155

• 小反刍兽疫
• 实时荧光定量PCR
• 疫苗
• 病毒含量

为了建立快速、敏感、特异的小反刍兽疫(peste des petits ruminants,PPR)活疫苗中病毒含量的检测方法，本研究根据GenBank数据库中登录的小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)基因序列设计合成特异性引物，采用RT-PCR扩增PPRV基因片段，并克隆至pUC57载体上，构建标准品质粒p UC57-N-PPRV，再采用SYBR GreenⅠ染料法进行实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测，绘制标准曲线并进行特异性、稳定性和重复性试验，同时应用于检测4批不同厂家生产的PPR活疫苗病毒含量。结果显示，用该方法检测病毒含量为2.61×101～2.61×109copies/μL的标准品，各稀释度质粒拷贝数与Ct值之间呈良好的线性关系，且相关系数高(R2=0.999)，说明引物特异性强。4批不同厂家生产的PPR活疫苗的病毒含量水平差异显著(P<0.05)。结果表明，该方法具有耗时短、灵敏度高、特异性强且稳定等优点，可用于检测PPR活疫苗中病毒含量水平。