牦牛VEGFA双荧光素酶载体构建及与miR-200b的靶向验证

作者：谢建鹏; 陈平; 王斐; 何振富

来源：寒旱农业科学, 2023, 2(08): 745-749.

• 牦牛
• 载体构建
• 双荧光素酶
• VEGFA基因
• miR-200b

为探究微小RNA(miR-200b)与血管内皮生长因子A(VEGFA)基因之间的靶向关系，采用miRanda和Targetscan软件预测牦牛miR-200b与VEGFA可能存在结合位点，构建了VEGFA基因3′UTR区的野生型和突变型双荧光素酶载体。利用与目的 miRNA靶种子序列相结合基因的突变序列，构建该靶基因的突变型重组质粒（pGL3-promoter-mut VEGFA），再进行重组质粒和目的 miRNA的miRNA mimic的共转染实验。结果表明，预测到的miR-200b与VEGFA基因的3′UTR区存在结合位点。PCR进行扩增和测序之后，VEGFA基因3′UTR区的野生型、突变型载体构建成功。共转染VEGFA野生型载体和miR-200b mimic的双荧光素酶活性极显著低于对照组（P<0.05）,VEGFA突变型载体和miR-200b mimic共转染的双荧光素酶活性与对照组无显著差异（P>0.05）。说明VEGFA基因的3′UTR区能与miR-200b结合并抑制双荧光素酶活性，验证了VEGFA是miR-200b的靶基因。

• 单位
  甘肃省农业科学院畜草与绿色农业研究所