着丝粒相关蛋白E的抗体制备

作者：马新; 朱长军; 姜伟

来源：国际生物医学工程杂志, 2016, 39(02): 74-78,后插2.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1673-4181.2016.02.002

• 着丝粒相关蛋白E
• 多克隆抗体
• 有丝分裂

目的制备着丝粒相关蛋白E(CENP-E)的兔源特异性多克隆抗体。方法应用分子克隆技术构建原核细胞表达质粒pHis-CENPEC410,并将其转化至表达菌株BL-21(DE3)感受态细胞中;然后用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达His-CENPEC410融合蛋白,再用Ni-NTA镍离子金属螯合树脂柱亲和层析法进行纯化;最后将纯化后的蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔,制备特异性CENP-E多克隆抗体,分别用免疫印迹法和免疫共沉淀法对免疫抗体血清进行检测,用免疫荧光染色法检测纯化的抗体。结果制备的抗体血清可较好地应用于免疫印迹和免疫共沉淀实验,纯化的抗体可用于免疫荧光染色。结论获得了具有较高特异性和灵敏度的CENP-E多克隆抗体,为后续CENP-E蛋白的研究奠定了基础。

• 单位
  中国医学科学院北京协和医学院; 天津师范大学; 生命科学学院