MBP和MEHP联合染毒致小鼠睾丸间质细胞的凋亡作用及其可能机制

作者：李玲^*; 员朋娟; 德小明; 李丽萍; 张亚娟; 李娅辉; 伊梦楠; 张鹏举; 刘贺荣

来源：环境与职业医学, 2019, 36(02): 175-180.

DOI：10.13213/j.cnki.jeom.2019.18553

• 邻苯二甲酸单酯
• 睾丸间质细胞
• 凋亡
• 联合染毒
• GRP78-ATF4-CHOP

[目的]探讨邻苯二甲酸单丁酯(MBP)和邻苯二甲酸单乙基己酯(MEHP)染毒致小鼠睾丸间质细胞的凋亡作用及葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、活化转录因子4(ATF4)与C/EBP同源蛋白(CHOP)参与的可能机制。[方法]培养小鼠睾丸间质细胞(TM-3细胞)并且测出细胞生长曲线;用CCK-8法检测细胞在染毒浓度400μmol/L状况下的细胞活性变化;用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡情况;应用免疫印迹法检测GRP78、ATF4和CHOP含量的变化。单因素方差分析法分析染毒组与对照组之间的关系,2×2析因设计法判断联合染毒的交互作用,当(|MBP+MEHP组指标-对照组指标)|<(|MBP组指标-对照组指标)|+(|MEHP组指标-对照组指标)|,可判定交互作用类型为拮抗作用。[结果]细胞在24～60 h时间段内处于对数生长期,且细胞正常状态下的凋亡数量比较稳定。细胞活性检测结果显示MEHP染毒对细胞的抑制率比MBP的大,并且MBP+MEHP联合染毒且具有交互作用,其作用方式为拮抗作用[24 h:(|53.21±7.68)%|<(|42.99±8.23)%|+(|65.46±8.29)%)|;36 h:(|79.87±3.76)%|<(|53.12±4.33)%|+(|74.80±4.96)%|;48 h:(|85.97±6.07)%|<(|38.98±9.59)%|+(|80.73±4.99)%|],具有统计学意义(P <0.05);细胞凋亡比例也呈现出MEHP组[早期凋亡:(17.44±0.82)%,总凋亡:(44.24±0.89)%]大于MBP染毒组[早期凋亡:(14.58±0.97)%,总凋亡:(29.46±0.58)%],同时出现MEHP+MBP联合染毒组[早期凋亡:(8.58±0.35)%,总凋亡:(32.28±0.41)%]的凋亡比例小于各单独染毒组之和,呈现出拮抗作用;ATF4和GRP78在MEHP染毒组的表达量高于MBP染毒组,MEHP+MBP联合染毒组表达量低于MEHP染毒组但高于MBP染毒组,并且表现出拮抗作用。CHOP的表达量与对照组相比也有变化,MEHP染毒组表达量较MBP染毒组表达量高,在MEHP+MBP联合染毒组表达量低于单独染毒组,并且表现出拮抗作用,但MBP染毒组没有主效应。[结论] MBP、MEHP染毒致TM-3细胞凋亡具有主效应,MBP和MEHP联合染毒致TM-3细胞凋亡具有交互作用,呈现拮抗作用。GRP78-ATF4-CHOP通路可能参与MBP、MEHP染毒致TM-3细胞的凋亡过程。

• 单位
  宁夏医科大学