基于内质网应激PERK/eIF2α/ATF4/CHOP通路探讨枳葛口服液含药血清对乙醇诱导BRL-3A损伤的保护作用及机制研究

作者：黄晓平; 苟沙沙; 李波; 王晓栋; 刘友平; 李志; 魏嵋^*

来源：世界科学技术-中医药现代化, 2023, 25(11): 3715-3723.

• 枳葛口服液
• BRL-3A细胞
• PERK/eIF2α/ATF4/CHOP信号通路
• 内质网应激
• 酒精性肝损伤

目的 基于内质网应激（Endoplasmic reticulum stress,ERS）信号通路PERK/eIF2α/ATF4/CHOP探讨枳葛口服液含药血清对BRL-3A大鼠肝细胞损伤的保护作用及机制。方法 (1)制备含药血清：SD雄性大鼠随机分为3组：枳葛口服液组、美他多辛组、正常组，分别予以枳葛口服液、美他多辛及生理盐水灌胃，连续干预5天，腹主动脉取血制备含药血清。(2)培养正常BRL-3A大鼠肝细胞，用不同浓度乙醇（1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%、5.0%、7.0%、10.0%）干预细胞24 h后用CCK-8法测定各组细胞存活率。(3)BRL-3A大鼠肝细胞分为正常组，模型组，美他多辛组，枳葛口服液低、中、高剂量组（后简称为低剂量组、中剂量组、高剂量组）。24 h后测定各组细胞上清液中γ-谷氨酰转肽酶（GGT）、乳酸脱氢酶（LDH）水平，CCK-8检测BRL-3A细胞存活率，Real-time PCR及Western blot检测各组细胞内PERK/eIF2α/ATF4/CHOP通路相关mRNA及蛋白表达水平。结果 (1)不同浓度乙醇（1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%、5.0%、7.0%、10.0%）干预细胞24 h后，细胞存活率随着乙醇浓度的升高呈逐渐下降趋势，当乙醇浓度为5%时，细胞存活率明显下降（P<0.05），故选择乙醇浓度为1.0%、1.5%、2.0%、2.5.0%、3.0%、5.0%进行后续实验。(2)与正常组相比，模型组上清液中GGT、LDH含量显著升高（P<0.05）,PERK/eIF2α/ATF4/CHOP通路相关因子mRNA和蛋白的表达显著升高（P<0.05），呈现明显肝损伤状态。(3)与模型组相比，枳葛口服液组及美他多辛组以上指标均呈现不同程度的降低，其中枳葛口服高剂量组效果最显著（P<0.05）。结论 枳葛口服液含药血清能够改善乙醇诱导的BRL-3A大鼠肝细胞损伤，其机制可能与抑制内质网应激PERK/eIF2α/ATF4/CHOP信号通路有关。

• 单位
  基础医学院; 西南医科大学