不同试剂盒对传粉昆虫携带混合花粉DNA提取效果比较

作者：李月; 魏玮; 刘文平; 赵凯旋; 周泽扬; 朱朝东; 罗阿蓉^*; 黄敦元^*

来源：应用昆虫学报, 2022, 59(06): 1336-1346.

• 传粉昆虫
• 混合花粉
• 粉源植物
• DNA试剂盒
• DNA宏条形码

【目的】传粉昆虫所携带花粉的准确鉴定是构建传粉网络的重要环节。本研究通过比较不同植物试剂盒在微量混合花粉DNA提取中的差异，以阐明不同试剂盒的提取效果，并明确满足DNA提取的混合花粉最低需求量。【方法】将不同地区中华蜜蜂Apis cerana cerana、凹唇壁蜂Osmia excavata和白斑切叶蜂Amegachilestrupigera体表携带的花粉进行混合。利用上海生工磁珠法植物基因组DNA抽提试剂盒(CZ)、北京BioTeke(百泰克)离心柱型微量样品基因组DNA提取试剂盒(BT)、美国Omega E.Z.N.A.?MicroElute基因组DNA提取试剂盒(EZ)、北京天根微量样品基因组DNA提取试剂盒(TG)及江苏吉锐Genloci?TNA抽提试剂盒(GL)提取混合花粉DNA。基于ITS2宏条形码技术获取测序数据，通过方差、线性判别和层次聚类分析，比较5种试剂盒提取效果。最后，调整试剂盒BT的提取方法，降低混合花粉的需求量。【结果】试剂盒TG与GL提取混合花粉DNA浓度较高，试剂盒CZ、BT和EZ提取混合花粉DNA浓度较低，前者浓度约为后者的5-15倍。试剂盒EZ和TG提取混合花粉样品的DNA纯度与其它试剂盒存在显著差异。5种试剂盒检测到植物种类分别为(143±12)(CZ)、(167±8)(BT)、(160±10)(EZ)、(160±6)(TG)和(161±16)种(GL)，且不同试剂盒在目、科和属水平上具有显著提取优势的植物，部分植物只能由特定试剂盒提取到DNA模板。此外，试剂盒BT通过花粉所鉴定的植物种类最多，且能提取到合格DNA模板的最低混合花粉质量为0.02mg。【结论】不同试剂盒提取微量混合花粉效果不同且各有优势，混合花粉质量最低可以降至0.02 mg。本研究为选择提取微量混合花粉DNA试剂盒继而用于传粉网络研究提供参考。

• 单位
  中国科学院动物研究所; 重庆师范大学; 生命科学学院