柚皮素对人自然杀伤细胞杀伤肝癌细胞的影响及其机制

作者：马利节; 于畅; 王芳; 唐亦非; 邬海龙; 孙学华; 高月求^*

来源：临床肝胆病杂志, 2022, 38(08): 1819-1824.

• 癌,肝细胞
• 柚皮素
• 自然杀伤T细胞
• 免疫疗法

目的 将人外周血单个核细胞体外扩增为自然杀伤(NK)细胞，与肝癌细胞1∶1共培养。观察柚皮素对NK细胞杀伤率的影响并初步研究相关机制。方法 淋巴细胞分离液分离人外周血单个核细胞，在体外经重组人白细胞介素2诱导培养NK细胞；0、3.125、6.25、12.5、25、50μmol/L浓度柚皮素作用于人肝癌细胞0、24、48 h后CCK8检测肝癌细胞增殖情况；不同浓度柚皮素作用于人NK细胞24 h后，CCK8检测NK细胞增殖情况；柚皮素作用于NK-肝癌细胞1∶1共培养体系24 h后，CellTiter-LumiTM检测NK细胞杀伤率；实时荧光定量PCR法检测NK细胞中激活型受体NKG2D的基因表达，以及肝癌细胞中NKG2D配体的基因表达。计量资料多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 经重组人白细胞介素2诱导培养后，NK细胞可扩增至人外周血单个核细胞的82.33%±0.70%;柚皮素作用24 h后，所有质量浓度组CLC5肝癌细胞的增殖率无明显差异(P值均>0.05),25及50μmol/L质量浓度组柚皮素对NK细胞的增殖有较明显的促进作用(P值均<0.000 1);柚皮素作用NK-肝癌细胞1∶1共培养体系24 h后，25、50μmol/L浓度组对NK细胞杀伤率均有明显提高(P值均<0.000 1);柚皮素作用于NK-肝癌细胞1∶1共培养体系24 h后，25、50μmol/L浓度组柚皮素对NK细胞中NKG2D的表达均无影响，对肝癌细胞中MICB、ULBP2的表达亦无影响(P值均>0.05),对肝癌细胞中ULBP1、ULBP3等NKG2D配体的表达有明显上调作用(P值均<0.001)。结论 柚皮素可能通过上调肝癌细胞中NKG2D配体表达，从而增加NK细胞的杀伤活性。

• 单位
  上海中医药大学附属曙光医院; 中心实验室; 上海中医药大学; 上海健康医学院