Cyclin E基因siRNA真核载体的构建及干扰效果的初步鉴定

作者：陈济; 潘巍巍; 魏丽丽; 袁成福; 易发平; 卜友泉; 宋方洲

来源：西南大学学报(自然科学版), 2008, 30(01): 69-74.

• RNA干扰
• 细胞周期蛋白E
• HeLa细胞
• 细胞周期

根据CyclinE(细胞周期蛋白E)基因序列,设计siRNA干扰序列,将带9个碱基茎环结构的干扰序列插入带U6启动子真核表达载体,构建针对CyclinE基因的shRNA真核表达载体.酶切和测序鉴定确认载体构建成功后,脂质体法转染宫颈癌HeLa细胞,观察绿色荧光蛋白表达检测转染效率,RT-PCR法检测载体对CyclinE基因的表达抑制效果.实验结果显示CyclinE基因的RNAi真核表达载体构建成功,转入HeLa细胞后可以特异抑制细胞中CyclinE基因的表达.其中靶向(+797~+819)位点的质粒干扰效果较好,基因表达抑制率为59%.这些结果为利用该载体抑制CyclinE基因进行宫颈癌基因治疗研究奠定了基础.

• 单位
  重庆医科大学