牛溶血性曼氏杆菌对BT细胞炎症因子及其TLR4/NF-κB信号通路影响的研究

作者：谢艺萌; 刘珊珊; 苏思雨; 蒋鹏轩; 张年洁; 张泽财; 王新; 朱战波

来源：中国预防兽医学报, 2023, 45(10): 1061-1065.

• 牛溶血性曼氏杆菌
• NF-κB信号通路
• 炎症细胞因子
• 新生牛鼻甲细胞

为探究牛溶血性曼氏杆菌（Mh）感染新生牛鼻甲（BT）细胞是否发生炎症反应及其涉及的信号通路，本研究将不同浓度的Mh分别感染BT细胞后经MTT法检测Mh对BT细胞的毒性作用，确定合适的感染浓度。结果显示，与空白对照细胞相比，以终浓度1×104 cfu/mL、1×105 cfu/mL的Mh感染后BT细胞的存活率均在80%以上；以浓度1×106 cfu/mL的Mh感染BT细胞后的细胞存活率在60%～70%，以终浓度1×107 cfu/mL的Mh感染BT细胞后的细胞存活率在50%以下；因此确定终浓度1×106 cfu/mL为Mh的最适感染浓度。将Mh以终浓度1×106 cfu/mL感染BT细胞后，采用荧光定量PCR （qPCR）检测细胞中细胞因子（IL-1β、IL-6及TNF-α） m RNA的转录水平；采用间接ELISA检测细胞上清中上述各细胞因子的分泌水平；通过western blot检测BT细胞中TLR4/NF-κB通路中Toll样受体4（TLR4）、p-P65、磷酸化NF-κB抑制蛋白（p-IκBα）的表达水平。q PCR和间接ELISA结果显示，Mh感染的BT细胞中促炎因子IL-6、IL-1β、TNF-α m RNA转录水平及蛋白分泌水平均极显著高于空白对照细胞（P<0.001）。Western blot结果显示，与空白对照组相比，Mh感染的BT细胞中TLR4、p-P65蛋白的表达水平显著升高（P<0.05）,p-IκBα蛋白的表达水平极显著降低（P<0.01）。本研究首次表明，Mh感染诱导BT细胞发生了炎症反应，并且该炎症反应是通过激活TLR4/NF-κB信号通路及其相关蛋白的表达实现的。本研究为Mh发病机制的研究及其所致疾病的防治提供参考依据。

• 单位
  动物科技学院; 黑龙江八一农垦大学