耐辐射奇球菌超氧化物歧化酶基因的克隆和表达

作者：孟玲; 许欣; 汪东篱; 占利; 裴晓方

来源：四川大学学报（医学版）, 2005, 36(02): 200-203.

DOI：10.3969/j.issn.1672-173X.2005.02.014

• 耐辐射奇球菌
• 超氧化物歧化酶
• 基因克隆

目的　构建耐辐射奇球菌 (D.radiodurans)锰超氧化物歧化酶 (Mn- SOD)基因的原核表达重组子 ,并在 E.coli BL 2 1(DE3)中表达。方法　用 PCR方法自 D. radiodurans基因组中扩增 Mn- SOD目的片段。将该基因与原核表达质粒载体 p ET- 30 a(+)连接 ,构建重组质粒 p ET- SOD,并转化表达宿主菌 E.coli BL 2 1(DE3)。用异丙基硫代 -β- D-半乳糖苷 (IPTG)诱导重组 SOD蛋白表达 ,SDS- PAGE分析表达产物。结果　获得了 D . radioduransMn- SOD基因的 p ET原核表达重组质粒 ,该质粒经 IPTG诱导能在 E.coli BL 2 1(DE3)中高效表达目的蛋白 ,蛋白活性可达 5 180 0 U / g湿菌体。结论　成功构建了原核表达重组质粒 p ET- SOD,实现了 SOD在原核细胞中的高效表达 ,表达产物活性较高 ,为重组 D. radiodurans Mn- SOD的进一步研究和应用奠定了基础。

• 单位
  四川大学; 公共卫生学院