南美红辣椒脉斑驳病毒RT-LAMP检测体系的建立及优化

作者：张俊蕾; 盖晓彤; 赵正婷; 刘弟; 陈敏; 姜宁^*; 刘雅婷^*

来源：植物保护, 2023, 49(06): 208-216.

DOI：10.16688/j.zwbh.2022704

• 南美红辣椒脉斑驳病毒
• 反转录-环介导等温扩增
• 灵敏度
• 检测

南美红辣椒脉斑驳病毒(chilli veinal mottle virus, ChiVMV)是一种严重危害茄科作物的正单链RNA病毒，也是云南烟草上的主要病毒之一。本研究采用单一变量法，建立并优化检测ChiVMV的反转录-环介导等温扩增(reverse transcription-loop-mediated isothermal amplification, RT-LAMP)体系。对RT-LAMP的反应时间、反应温度及体系中Mg2+、dNTPs、甜菜碱浓度和内外引物浓度比进行优化，同时用RT-PCR对优化后的RT-LAMP检测体系进行灵敏度验证。结果表明，最佳引物组为CH-CP-3,在25μL反应体系中各组分最佳加入量为：缓冲液2.5μL,MgSO4(100 mmol/L) 0.5μL,dNTPs (10 mmol/L) 0.5μL,FIP/BIP (10 mmol/L) 2μL,F3/B3 (10 mmol/L) 0.5μL,LF/LB (10 mmol/L) 1.5μL,甜菜碱(5 mmol/L) 5μL,Bst 2.0 WarmStar DNA Polymerase (8 000 U/mL) 0.5μL,M-MLV酶(10 000 U/mL) 0.125μL,RNA (≥50.7 fg) 1μL,DEPC H2O补至25μL;最佳反应温度及时间为63℃50 min,优化后的RT-LAMP检测结果与RT-PCR检测结果一致，且其灵敏度是RT-PCR的100倍。本研究建立的ChiVMV RT-LAMP检测方法具有快速、灵敏和操作简便等优点，为开发ChiVMV RT-LAMP检测试剂盒及其实际应用提供了重要基础。

• 单位
  云南省烟草农业科学研究院; 昭通市植保植检站; 云南农业大学