皱褶假丝酵母脂肪酶CRL1在毕赤酵母中的高效表达及其催化合成维生素E醋酸酯

作者：郝月绰; 林影; 梁书利

来源：现代食品科技, 2018, 34(10): 126-132+187.

• 皱褶假丝酵母脂肪酶
• 毕赤酵母
• 蛋白纯化
• 酶学性质
• 维生素E醋酸酯 Candida rugosa lipase
• Pichia pastoris
• purification
• characterization
• vitamin E acetate

本研究将经密码子优化的皱褶假丝酵母脂肪酶(Candida rugosa lipase) CRL1基因克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pHKA,构建得到重组菌株GS115/pHKA-CRL1;经摇瓶发酵并结合甲醇诱导120 h处理,该菌株对底物对硝基苯酚丁酯(p NPB)的水解活力达到39.73 U/mL。通过对AOX1启动子和α分泌信号肽同时进行改造,进一步获得重组菌株GS115/pHKA-AOX1m/αm-CRL1,其脂肪酶活力提高达到63.63 U/mL。发酵液上清液经超滤浓缩、硫酸铵沉淀后,再经脱盐和阴离子交换层析处理,获得纯化的重组CRL1。该纯化工艺的纯化倍数为5.41倍,回收率为33....

• 单位
  华南理工大学; 生物科学与工程学院