RNA干扰沉默哺乳类动物雷帕霉素靶蛋白基因表达对大鼠血管平滑肌细胞增殖活性及移植血管内膜增生的影响

作者：胡新华; 张强; 杨军; 刘程伟; 张志深; 杨德华

来源：中华医学杂志, 2007, 87(01): 58-62.

DOI：10.3760/j:issn:0376-2491.2007.01.016

• RNA
• 基因表达
• 肌,平滑,血管
• 血管内膜
• 大鼠

目的构建靶向哺乳类动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因的 RNA 干扰表达载体,研究其对离体培养的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖活性及大鼠自体移植静脉内膜增生的影响。方法设计并合成针对大鼠 mTOR 基因的短发夹环 RNA(shRNA)序列和对照序列,插入逆转录病毒载体pLXIN,转染包装细胞获得重组的病毒载体。感染 VSMC,Northern 杂交和免疫蛋白印迹检测 mTOR及其下游底物4E-BP1和 p70s6k 表达的变化,流式细胞仪检测 VSMC 增殖周期的变化,MTT 法检测VSMC 增殖活性的改变。建立大鼠自体静脉移植模型54只,随机分成转基因组、对照组、空白对照组,术后7 d、14 d、28 d 取材,常规 HE 染色、免疫组织化学染色、免疫蛋白印迹检测 mTOR 表达,TUNEL 法检测 VSMC 凋亡。结果 shRNA 序列插入 pLXIN 载体,成功包装并且感染 VSMC,证实针对mTOR 基因的 pLXIN-shRNA 能够显著抑制 mTOR 表达,mTOR 通路下游的 p70s6k 表达减少,而4E-BP1的表达却显著增加;被感染 VSMC 的分裂、增殖过程受阻,更多细胞停滞在 G_0/G_1期;局部感染移植血管能够显著减少 mTOR 基因的 mRNA 及蛋白质产物表达(均 P<0.01),内膜增生程度亦较其他组明显减轻(P<0.01),凋亡细胞增多(P<0.01)。结论成功构建靶向 mTOR 基因的 RNA 干扰表达载体,沉默 mTOR 基因表达能够抑制 VSMC 分裂、分化和增殖,减轻内膜增生,增加 VSMC 凋亡。

• 单位
  中国医科大学附属第一医院