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摘要
【目的】辣木生产中鳞翅目害虫辣木瑙螟危害日益严重，为提高辣木抗虫性，使用农杆菌介导法将抗虫基因导入辣木，以期获得抗虫转基因转化子。【方法】利用内质网定位修饰的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(sck)和苏云金芽孢杆菌基因(Cry1-Ac)筛选标记基因nptⅡ ；利用农杆菌EHA105介导遗传转化辣木PKM-1的叶片和茎段，以卡那霉素筛选获得抗性植株；采用PCR和NPTⅡ ImmunoStrip检测确定nptⅡ 基因的整合与表达。【结果】辣木叶片和茎段无需预培养可直接进行农杆菌转化，最佳转化条件为：工程菌液OD600值为0.2，侵染时间为2 min，共培养时间为2 d；乙酰丁香酮添加与否对获得抗性愈伤率的影响不明显；200 mg/L提门叮可有效抑制农杆菌生长；卡那霉素抗性愈伤组织PCR检测表明：标记基因nptⅡ 已成功整合到辣木PKM-1基因组中；NPTⅡ ImmunoStrip检测表明NPTⅡ 蛋白水平得以表达。【结论】获得了辣木PKM-1卡那霉素抗性愈伤组织，为辣木抗虫分子育种提供了材料。
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