一种高效、稳定的可溶性原核表达载体的构建及应用

作者：高闪电; 常惠芸; 独军政; 丛国正; 邵军军; 林彤

来源：华北农学报, 2009, (06): 46-49.

• 口蹄疫病毒
• 原核表达
• 可溶性
• 信号肽 Foot-and-mouth disease virus
• Prokaryotic expression
• Soluble protein expression
• Signal peptide

以O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因重组克隆载体pGEM-OVP1为模板,设计表达引物,经PCR扩增获得上游带有PelB信号肽编码序列的VP1 C端编码区,将其克隆至该表达载体pET-30a(+)中,构建了可溶性原核表达载体pET-30a-PelB-VP1C。将VP1全长编码区替换VP1C,获得重组原核表达载体pET-30a-PelB-VP1。将两种重组质粒分别转化大肠杆菌工程菌株BL21-(DE3)-plysS,经IPTG诱导表达,实现了VP1全长及其C端的可溶性表达,以金属离子螯合层析法分别对表达的VP1及其C端融合蛋白进行纯化,SDS-PAGE显示纯化的目的蛋白分别在32 ku和20 ku...