三种方法浓缩慢病毒后绿色荧光蛋白转染效率的比较

作者：毕冉冉; 白睿; 刘志强; 刘惠亮^*

来源：武警医学, 2019, 30(01): 62-66.

DOI：10.14010/j.cnki.wjyx.2019.01.016

• 质粒
• 慢病毒
• 绿色荧光蛋白

目的比较超滤管法、超速离心法及病毒浓缩液法浓缩慢病毒后绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的转染效率。方法用摇床过夜摇pMD2. G、psPAX2及GFP载体菌种并用试剂盒提取这三种质粒;将pMD2. G、psPAX2及GFP载体质粒与转染试剂按比例混合后转染293T细胞生产病毒;收集病毒上清液并用超滤管法、超速离心法及病毒浓缩液法浓缩慢病毒;将接种的293T细胞分为3组,并向每组接种有293T细胞的培养液中加入2、4、8、16μl三种方法浓缩的病毒浓缩液,48 h后用荧光显微镜观察和流式细胞仪检测三种方法浓缩慢病毒后转染293T细胞的GFP表达情况。结果荧光显微镜观察结果显示随着转染量的增加,GFP表达率增加,超滤管法浓缩病毒转染293T细胞后GFP的表达效率最高;流式检测显示病毒浓缩液法组2、4、8、16μl GFP的表达率分别为(2. 4±0. 1)%、(3. 8±0. 3)%、(8. 2±0. 6)%、(12. 2±0. 3)%;超滤管法组2、4、8、16μl GFP的表达率分别为(5. 4±0. 3)%、(7. 4±0. 4)%、(12. 7±0. 1)%、(17. 3±0. 6)%;超速离心法组2、4、8、16μl GFP的表达率分别为(0. 7±0. 1)%、(1. 2±0. 1)%、(2. 1±0. 1)%、(0. 4±0. 2)%。超滤管法组与其他两组比较,P <0. 05,差异有统计学意义。结论不同方法浓缩慢病毒后的GFP转染效率不同,三种慢病毒浓缩方法中超滤管法浓缩慢病毒后的GFP转染效率最高。

• 单位
  军事医学科学院; 解放军总医院