草地贪夜蛾取食诱导下玉米酵母双杂交文库的构建及ZmRop1互作蛋白筛选

作者：张浩然; 曾曼; 王玉雪; 楚龙燕; 王香萍; 史彩华; 于永浩; 张建民

来源：南方农业学报, 2022, 1-12.

• 玉米
• 草地贪夜蛾
• 酵母双杂交
• ZmRop1

【目的】构建以草地贪夜蛾取食诱导后的酵母cDNA文库以及编码植物Rac蛋白的诱饵载体，并从文库中筛选ZmRop1的互作蛋白，分析其互作蛋白的特征及功能，为玉米抗草地贪夜蛾相关基因的筛选及Rac蛋白在玉米中的信号传导机制解析打下基础。【方法】以草地贪夜蛾取食后的玉米品种郑单958不同组织为材料提取总RNA，利用SMART技术反转录合成ds cDNA，连接pGADT7载体后转化到酵母Y187中构建玉米酵母双杂交cDNA文库；并以玉米cDNA为模板克隆ZmRop1，构建诱饵载体pGBKT7-ZmRop1，经酶切及测序鉴定后转化到酵母AH109中，并鉴定诱饵蛋白毒性及自激活活性。通过mating法以ZmRop1为诱饵从cDNA文库筛选其潜在互作蛋白。【结果】研究获得的玉米cDNA文库库容量为4.08×10~(6 )CFU，文库滴度1.3×10~(8 )CFU，文库片段多样性良好，文库重组率91.7%；诱饵载体pGBKT7-ZmRop1成功转入AH109且经过鉴定证明无毒性、无自激活活性；从文库中初步筛选到22个与ZmRop1互作的蛋白，分析表明参与调控植物防御等多种生物学活动。【结论】构建的酵母双杂交cDNA文库符合建库要求；构建的ZmRop1诱饵载体无毒性和自激活活性；且筛选到22个可能与ZmRop1互作的蛋白，为进一步研究ZmRop1信号传导机制，及玉米和草地贪夜蛾的互作机制提供支持。

• 单位
  长江大学; 广西作物病虫害生物学重点实验室