CASP8AP2功能域缺失对细胞柔红霉素敏感性影响的实验研究

作者：刘潇; 刘飞飞; 王凯玲; 李志刚^*

来源：北京医学, 2020, 42(11): 1132-1136.

DOI：10.15932/j.0253-9713.2020.11.022

• 半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶8相关蛋白2
• 死亡效应区募集域功能域
• 柔红霉素
• 化疗敏感性

目的探讨半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶8相关蛋白2(caspase 8 associated protein 2, CASP8AP2)的4个功能域与细胞柔红霉素(daunorubicin, DNR)敏感性的关系。方法将CASP8AP2的野生型及4种缺失突变体分别转入293T细胞,同时转染空载质粒作为阴性对照。4种突变体分别缺失卷曲螺旋域(coiled coil, CC)、FLASH-ARS2结合域(FLASHARS2 binding region, FARB)、死亡效应区募集域(death effector domain-recruiting domain, DRD)、转录因子NF-κB激活域(NF-κB activation domain, NAD)。在CASP8AP2表达到峰值时,经不同浓度DNR作用36 h,采用MTS方法检测细胞存活率和半数抑制浓度(IC50)值。结果高表达CASP8AP2野生型以及4种缺失突变体的293T细胞经DNR作用后,存活率明显低于转染空载质粒的细胞,IC50值显著降低,差异均有统计学意义(P <0.05)。与WT-CASP8AP2相比,过表达CASP8AP2-ΔDRD细胞的存活率明显提高(P=0.025),IC50值也显著增高(0.236μg/ml比0.283μg/ml, P <0.01);而过表达突变体ΔCC、ΔFARB和ΔNAD的细胞存活率与WT-CASP8AP2无明显差异;而突变体ΔDRD细胞存活率及IC50值均明显高于其他3种突变体(P <0.05)。结论高表达野生型及4种缺失突变体的CASP8AP2可以提高293T细胞对DNR的敏感性。CASP8AP2-DRD功能域的缺失可下调293T细胞对DNR的敏感性。

• 单位
  首都医科大学附属北京儿童医院