体外合成mRNA高效电转人胚胎干细胞

作者：吴栋; 马石楠; 杨梦洁; 王小莉^*

来源：药物生物技术, 2019, 26(06): 477-480.

DOI：10.19526/j.cnki.1005-8915.20190602

• 体外合成mRNA
• 电转
• 人胚胎干细胞
• 基因转染
• 高效
• 共转

建立体外合成mRNA高效转染人胚胎干细胞(h ESCs)的方法,为高效基因转染h ESCs提供一种新选择。体外合成绿色荧光蛋白mRNA (e GFP mRNA)通过脂质体和电转的方法转染h ESCs,流式检测阳性率,台盼蓝染色检测细胞存活率。HN4人胚胎干细胞中转染不同剂量的e GFP mRNA和e GFP质粒,流式检测阳性率和荧光强度。将e GFP mRNA转染HN4和i PS细胞系,流式检测其转染效率。免疫荧光检测电转e GFP mRNA对HN4细胞干性的影响。体外合成红色荧光蛋白(DsRed mRNA)和e GFP mRNA共转HN4细胞荧光显微镜观察共转效果。体外合成e GFP mRNA可通过电转的方式高效进入HN4细胞中,并且电转后细胞状态良好,细胞存活率为94. 6%±0. 67%,在h ESCs和i PS细胞系中转染效率均达到99%以上。HN4细胞中电转低剂量的e GFP mRNA即可高效进入细胞并持续高效表达4 d。电转e GFP mRNA的HN4细胞可保持良好的干细胞特性,并且多种体外合成mRNA可高效共转h ESCs。体外合成mRNA可通过电转的方式高效转入h ESCs中,体外合成mRNA技术为h ESCs高效基因转染提供了一个新思路。

• 单位
  湖北医药学院附属太和医院