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摘要
目的克隆表达肺炎链球菌中一个潜在β-内酰胺酶基因SP0010并进行晶体学研究和生物信息学分析,以期阐明该蛋白的生理功能,为其疫苗研究奠定基础。方法从数据库中查询获得肺炎链球菌TIGR4菌株基因SP0010及其编码蛋白Sp0010的序列信息,利用生物信息学分析软件对Sp0010的生物学功能进行预测和分析;利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导已构建的菌株Rosetta(DE3)/pET28a(+)-SP0010中目标蛋白Sp0010表达,经Ni2+柱亲和层析、分子筛纯化及浓缩后用晶体初筛试剂盒进行初筛,对筛出的蛋白Sp0010晶体进行优化。结果基因SP0010编码422个氨基酸残基,生物信息学分析显示其编码蛋白Sp0010具有信号肽,是一种表达后分泌至细胞外的亲水性蛋白;同源建模显示Sp0010具有N端和C端两个结构域,且C端结构域形成具有"β-内酰胺酶折叠类似"结构;抗原表位分析表明Sp0010含有7个优势抗原表位,具有免疫原性;晶体筛选显示Sp0010的初试结晶条件为25%polyethylene glycol 3350,0.2mol/L MgCl2,0.1mol/L Hepes,pH 7.5。结论蛋白Sp0010可在大肠杆菌中重组表达,表达蛋白可形成晶体,这为研究其结构与功能奠定了基础。
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