口腔鳞癌细胞外泌体分离鉴定及基因表达谱研究

作者：王世琴; 金佳佳; 胡慧珍; 孙贵军; 李志勇; 何祥一^*

来源：中华肿瘤防治杂志, 2018, 25(19): 1343-1350.

DOI：10.16073/j.cnki.cjcpt.2018.19.002

• 口腔鳞癌
• 外泌体
• 分离鉴定
• 基因表达谱

目的口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤,易复发和转移,预后较差。寻找特异性的生物标志,进行无创性的早期筛查或诊断工具的开发,对改善OSCC患者预后差、生存率低、复发率高的现状至关重要。本研究旨在对OSCC细胞(Cal27)及口腔上皮细胞(human oral epithelial cells,HOEC)来源的外泌体进行分离鉴定及基因表达谱分析,为寻找与OSCC相关的特异性外泌体提供研究基础。方法采用超速离心法从细胞培养上清中分离外泌体,透射电镜观察其形态特征,粒度仪分析其粒径,蛋白质印记法及流式细胞术检测其标志蛋白(ALIX、CD63、CD81)。利用高通量测序技术全面掌握两种外泌体基因表达谱,筛选差异表达基因,并进行生物通路分析。结果 Cal27及HOEC外泌体均呈圆形或椭圆形,直径均分布在30～150nm,ALIX、CD63、CD81标志蛋白呈现阳性表达。基因表达谱分析结果显示,两种外泌体间发生差异有统计学意义,|log2Fold Change|>1,q<0.001。表达变化的基因共有336个,KEGG生物通路富集分析发现共30个通路符合阈值要求(P<0.05),其中32个基因(如ACVR1C、CDH20、THBS1等)及8个生物通路(如Wnt信号通路、PI3K-Akt信号通路、TGF-β信号通路等)与癌症的发生发展密切相关。结论 OSCC细胞及HOEC均能产生丰富的外泌体。OSCC细胞外泌体基因表达谱与HOEC外泌体基因表达谱相比存在很大的差别,通过对二者基因表达谱的分析,筛选出了可能与口腔鳞癌发生发展相关的差异表达基因及生物通路,为寻找与口腔鳞癌相关的特异性外泌体奠定了基础。

• 单位
  兰州大学; 中国农业科学院兰州兽医研究所