TRIM21基因SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立

作者：赵克学; 许淑娟; 马瑞仙; 耿金静; 刘杨; 李琼毅^*; 冯若飞^*

来源：热带生物学报, 2020, 11(01): 111-117.

DOI：10.15886/j.cnki.rdswxb.2020.01.017

• 三基序蛋白21
• 荧光定量PCR
• 标准曲线

三基序蛋白21(TRIM21)与癌症、肿瘤及固有免疫等密切相关。为了快速检测TRIM21基因的表达,根据Genbank中公布的TRIM21基因序列设计引物,通过常规PCR扩增该基因后克隆至pMD-18T载体上,测序并鉴定正确后制备重组质粒,以pMD-18T-TRIM21重组质粒作为标准品进行荧光定量PCR并建立标准曲线。采用重复性、特异性及灵敏性等试验,成功建立了检测TRIM21基因的荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法灵敏度高,最低检测下限为37.7 copies·μL-1,比普通PCR高出10倍。在3次独立的试验中,组内和组间变异系数较小,具有较高的可重复性,同时,还能检出不同细胞中TRIM21的表达。因此,该荧光定量方法可为TRIM21的检测及临床研究提供技术支持。

• 单位
  西北民族大学