活血接骨方对骨髓间充质干细胞成骨分化中Wnt信号通路及Sclerostin基因的影响

作者：俞云飞; 王建伟; 冯骅; 尹恒; 华臻; 吴毛^*

来源：世界科学技术-中医药现代化, 2021, 23(04): 1021-1029.

• Sclerostin
• 人骨髓间充质干细胞
• Wnt信号通路

目的探究活血接骨方对骨髓间充质干细胞成骨分化中Wnt信号通路及Sclerostin基因的影响。方法使用"续骨活血汤"含药血清和(或)BMP-4干预BMSCs并分为4组:对照组、中药组、BMP-4组和中药+BMP-4组。通过检测线粒体脱氢酶活性(CCK-8)及细胞DNA含量反映BMSCs细胞活性。采用ALP染色和茜素红染色检测成骨诱导28天后各组细胞ALP活性和矿化情况;采用荧光定量PCR和Western Blot法检测各组细胞中成骨相关基因(Col1A2、OC、OPN)和Sclerostin基因表达情况。使用(低浓度、中浓度、高浓度)活血接骨方含药血清体外干预BMSCs 7天后检测Sclerostin基因及Wnt信号通路相关分子(Wnt5a、GSK-3β)的表达情况。结果与对照组相比,其他3组BMSCs出现明显矿化,且BMP-4组矿化程度高于中药组,而中药+BMP-4组矿化程度最高(P <0.05);成骨相关因子Col1A2、OC、OPN也呈现相同趋势的表达上调(P <0.05),但Sclerostin基因呈现明显表达下调(P <0.05)。与空白对照组相比,各浓度含药血清组BMSCs中Wnt5a的表达呈现浓度依赖性上调(P <0.05),而Sclerostin、GSK-3β和P-GSK-3β的表达则呈现浓度依赖性下调(P <0.05)。结论活血接骨方具有促进BMSCs体外成骨分化作用,其机制可能与抑制Sclerostin基因表达,激活Wnt信号通路相关。

• 单位
  无锡市中医医院