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摘要
为建立一种快速、准确的梅迪-维斯纳病毒（MVV）抗体检测方法，本研究利用DNAStar生物学软件对MVV衣壳蛋白（CA）和MVV跨膜蛋白（TM）的抗原表位分析，利用重叠延伸PCR(SOE PCR)获得CA-TM融合基因，构建表达质粒p Easy-E1-CA-TM，将其转化大肠杆菌BL21后诱导蛋白表达并纯化，经SDS-PAGE检测结果显示，得到重组CA-TM蛋白（rCA-TM）,r CA-TM以包涵体形式表达。以获得的rCA-TM作为包被抗原，采用方阵法优化各反应条件，建立了MVV间接ELISA检测方法。利用该方法检测羊临床常见病原阳性血清，结果显示，除MVV阳性血清以外，口蹄疫病毒、小反刍兽疫病毒、绵羊肺炎支原体等绵羊临床常见病原的阳性血清均为阴性，特异性较强，且该方法能识别感染MVV病畜体内产生的CA蛋白和TM蛋白抗体。将MVV阳性血清2倍倍比稀释（1:500～1:32 000）后，分别利用建立的MVV间接ELISA方法及商品化MVV抗体ELISA试剂盒检测，结果显示商品化MVV抗体ELISA试剂盒最低可检测出1:40 00倍稀释的阳性血清，而本研究建立的间接ELISA方法最低可检测出1:16 000倍稀释的阳性血清，敏感性较高。重复性试验结果显示，该方法批内、批间试验的变异系数分别为3.6%～6.9%、2.3%～8.5%，均小于10%，重复性较好。利用本实验建立的MVV间接ELISA方法和商品化MVV抗体ELISA试剂盒对69份绵羊临床样品检测，结果显示，本实验建立的ELISA方法检测出31份阳性样品，38份阴性样品；商品化MVV抗体ELISA检测试剂盒检出37份阳性样品，32份阴性样品。二者的阳性符合率为83.7%，阴性符合率为100%，总符合率为91.3%。本研究首次基于MVV rCA-TM建立了MVV间接ELISA检测方法，且该方法能够分别识别CA蛋白抗体和TM蛋白抗体，不仅减少了因为血清转换而导致血清抗体检测不准确的影响，还扩大了检测范围，为内蒙地区绵羊梅迪-维斯纳病的诊断及净化提供了检测手段。
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