重组人烯醇酶-α的原核表达及生物信息学分析

作者：王波^*; 刘思雨; 罗红

来源：基础医学与临床, 2019, 39(09): 1300-1304.

DOI：10.16352/j.issn.1001-6325.2019.09.015

• 烯醇酶-α
• 原核表达
• 生物信息学

目的通过原核表达技术获得人烯醇酶-α(ENO1)重组蛋白,并对表达产物进行生物信息学分析及抗体结合测定,为应用血清学检测技术进行肝纤维化早期诊断奠定基础。方法根据GenBank中登录的ENO1序列(cDNA clone BC015641, MGC:23319 IMAGE:4643088),设计特异性引物,以ENO1的cDNA为模板,用PCR技术扩增ENO1序列,构建该基因的克隆载体pEASY-T1/ENO1及表达载体pET-32a(+)/ENO1,通过IPTG诱导表达重组蛋白rENO1。利用生物信息学相关软件(ProtParam、ProtScale、SignalP 4.1 server、Signal-3L、TMpred、DAS、NetPhos 2.0 Server)分析人ENO1蛋白的理化性质、信号肽、跨膜域及磷酸化位点等信息,并通过Western blot检测其与相应抗体的反应性。结果成功构建重组质粒pEASY-T1/ENO1及表达载体pET-32a(+)/ENO1,构建的克隆质粒测序结果与GenBank中登录的ENO1序列的比对符合率为100%。获得的ENO1融合蛋白分子质量约为67 ku。该ENO1片段由434个氨基酸组成,其相对分子质量为47 168.96,理论pI为7.01,是一种稳定的亲水性蛋白。该蛋白与相应抗体具有良好的反应性。结论重组人烯醇酶-α可以通过原核表达技术获得。获得的烯醇酶-α融合蛋白片段为稳定的亲水性胞外蛋白,可以与相应抗体反应,为其作为相关标志物用于肝纤维化的早期快速诊断奠定基础。

• 单位
  大连医科大学; 大连市中心医院