两种实时荧光定量PCR方法的建立及其用于献浆者血液单纯疱疹病毒检测的有效性比较

作者：毕跃东; 胡高翔; 丁显平

来源：中国输血杂志, 2014, 27(06): 606-610.

DOI：10.13303/j.cjbt.issn.1004-549x.2014.06.013

• 单纯疱疹病毒
• 实时荧光定量PCR
• 血液检测
• 献浆者
• 血液安全

目的建立基于SYBR Green和Taqman探针的2种实时荧光定量PCR(qPCR)方法,用于检测人单纯疱疹病毒(HSV)并评估2种方法检测血浆中HSV的有效性。方法根据GenBank中HSV的UL30基因保守序列设计引物和探针,并构建含有UL30基因保守序列的重组质粒,以该重组质粒为标准品,通过对144(人)份献浆者HSV的检测,建立并评估基于SYBR Green和Taqman探针的2种qPCR检测方法。结果所建立的2种qPCR方法对于HSV均具有高度特异性,对HBV和梅毒无交叉反应;检测灵敏度高,检测下限均为5×101cp/反应体系,并都有较好的批间和批内重复性;基于SYBR Green的qPCR检测方法得到的熔解曲线峰单一。应用该2种qPCR方法对献浆人群血浆标本HSV检测:检出率均为2.08%(3/144),二者都能用于HSV载量的测定。结论成功建立了2种qPCR反应体系,二者对HSV的检测特异性强、灵敏度高、均一性好,可应用于献血(浆)者血液检测。

• 单位
  生命科学学院; 成都生物制品研究所有限责任公司; 四川大学