检测基孔肯雅病毒SYBR Green I real-time PCR方法的建立及应用

作者：于宁; 李成辉; 汪伟; 庄忻雨; 孙福亮; 肖朋朋; 鲁承^*; 鲁会军^*; 金宁一^*

来源：中国病原生物学杂志, 2020, 15(07): 795-799.

DOI：10.13350/j.cjpb.200709

• 基孔肯雅病毒
• SYBR Green Ⅰ real-time PCR
• E1基因

目的建立一种基孔肯雅病毒的快速诊断方法。方法采用基孔肯雅病毒E1基因的重组质粒作为阳性标准品。优化反应条件,建立针对基孔肯雅病毒的SYBR Green I real-time PCR检测方法,并对其特异性、灵敏性和重复性进行评价。结果建立的SYBR Green I real-time PCR检测方法的Ct值与阳性标准品在6.94×100～6.94×108 copies/μl范围内呈良好的线性关系,相关性为0.997,斜率为-3.571;其检测下限为0.694 copies/μl,且对ZIKV、DENV和JEV等均无特异性扩增;所有稀释倍数的标准品在84.0℃出现特异性熔解峰;组内和组间变异系数均小于2%。采用该方法对93份蚊虫样品进行检测,基孔肯雅病毒核酸阳性率为2.15%,普通PCR核酸阳性率为1.07%。结论成功建立了针对基孔肯雅病毒E1基因的SYBR Green I real-time PCR检测方法。该方法灵敏、特异,可用于基孔肯雅病毒感染的快速诊断。

• 单位
  广西大学; 延边大学; 温州大学