碱性成纤维细胞生长因子真核荧光表达载体的构建

作者：许予明; 马兴荣; 宋波; 秦洁; 唐洲平; 赵国强; 张苏明

来源：郑州大学学报(医学版), 2004, (04): 578-581.

DOI：10.13705/j.issn.1671-6825.2004.04.011

• 碱性成纤维细胞生长因子
• 逆转录聚合酶链反应
• 荧光真核表达载体

目的 :构建可在真核细胞中表达碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)的真核表达载体 ,为进一步开展bFGF基因治疗缺血性脑血管疾病奠定基础。方法 :①采用线栓法建立SD大鼠大脑中动脉局灶性脑缺血模型 ,取缺血灶周围脑组织经逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)扩增bFGF基因 ;②将bFGFDNA克隆到pGEM TEasy质粒 ,经菌落PCR和HindⅢ和EcoRI双酶切鉴定 ;③然后将bFGFDNA亚克隆到pEGFP N3质粒 ;通过抗性基因筛选阳性克隆 ,经菌落PCR、酶切和测序鉴定。结果 :菌落PCR、酶切和DNA序列鉴定均证实插入片段与GenBank报道的bFGF基因序列一致。结论 :经RT PCR反应得到了特异的bFGF基因片段并成功构建了bFGF荧光真核表达载体

• 单位
  基础医学院; 郑州大学; 华中科技大学同济医学院附属同济医院; 神经内科; 第一附属医院神经内科