circEPSTI1通过靶向调控miR-216b-5p调节胃癌细胞顺铂耐药性

作者：郭海龙; 马晔; 王晓耘; 史佩东; 万伯顺^*

来源：中国细胞生物学学报, 2023, 45(05): 744-752.

• 胃癌
• 顺铂耐药性
• circEPSTI1
• miR-216b-5p
• 细胞增殖
• 迁移
• 侵袭

该研究的目的是为了观察circEPSTI1是否通过靶向调控miR-216b-5p对胃癌细胞顺铂耐药性产生影响,并探讨其可能的作用机制。采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测胃癌组织、癌旁组织、人胃黏膜细胞GES-1、人胃癌细胞HGC27与胃癌耐药性细胞HGC27/DDP中circEPSTI1与miR-216b-5p的表达情况;使用双荧光素酶报告实验验证circEPSTI1与miR-216b-5p的靶向调控关系;以HGC27/DDP细胞为研究对象,实验分组:si-NC组、si-circEPSTI1组、si-circEPSTI1+anti-miR-NC组、si-circEPSTI1+anti-miR-216b-5p组;采用CCK-8法、平板克隆形成实验、流式细胞术与Transwell实验分别检测细胞增殖、克隆形成、凋亡、迁移及侵袭; Western blot检测Cleavea-caspase 3、Cleavea-caspase 9、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达情况。结果显示,与癌旁组织相比,胃癌组织中的circEPSTI1表达上调(P<0.05), miR-216b-5p表达下调(P<0.05);与GES-1细胞相比,HGC27细胞、HGC27/DDP细胞的circEPSTI1表达上调(P<0.05), miR-216b-5p表达下调(P<0.05);与HGC27细胞相比, HGC27/DDP细胞的circEPSTI1表达上调(P<0.05), miR-216b-5p表达下调(P<0.05); miR-216b-5p过表达可降低wt-circEPSTI1的荧光素酶活性(P<0.05),未影响mut-circEPSTI1的荧光素酶活性;与si-NC组相比, si-circEPSTI1组细胞增殖抑制率、凋亡率和Cleavea-caspase 3、Cleavea-caspase 9、E-cadherin蛋白表达上调(P<0.05),克隆形成数、迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05), N-cadherin蛋白表达下调(P<0.05);与si-circEPSTI1+antimiR-NC组相比, si-circEPSTI1+anti-miR-216b-5p组细胞增殖抑制率、凋亡率和Cleavea-caspase 3、Cleavea-caspase 9、E-cadherin蛋白表达下调(P<0.05),克隆形成数、迁移及侵袭细胞数增加(P<0.05),N-cadherin蛋白表达上调(P<0.05)。结果表明, circEPSTI1通过靶向抑制miR-216b-5p表达促进胃癌耐药性细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭,抑制胃癌耐药性细胞凋亡,从而增强胃癌细胞对DDP的耐药性,该机制可能与改变凋亡相关蛋白表达情况和逆转上皮–间质转化过程有关。

• 单位
  上海市嘉定区中心医院