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摘要
牛病毒性腹泻病的感染情况日趋严重，给养殖业造成了严重的损失，目前我国缺乏有效的治疗手段，导致感染模式复杂化，其致病机制和病毒-宿主之间相互作用研究也尚不清楚。为了探究囊泡运输蛋白(vesicle transport protein homolog, SEC22B)敲低对牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)复制的影响，根据GenBank数据库中SEC22B基因序列，使用Benchling平台设计向导RNA(small guide RNA, sgRNA)，克隆至LentiCRISPR v2载体后进行慢病毒包装，使用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲低胎牛肾细胞(madin-darby bovine kidney cells, MDBK)中的SEC22B基因表达，使用Western blot鉴定SEC22B基因敲低(knockdown, KD)情况；BVDV感染SEC22B KD细胞不同时间后，分别使用qPCR和免疫荧光染色检测BVDV 5’UTR mRNA水平变化和双链RNA(double-stranded RNA, dsRNA)量，使用Reed-Muench法测定BVDV感染不同时间后子代病毒滴度变化。Western blot检测发现，与对照Scramble细胞相比，SEC22B KD细胞中SEC22B蛋白表达量显著降低；与BVDV感染Scramble细胞相比，BVDV感染SEC22B KD细胞后5’UTR mRNA水平和dsRNA量均极显著降低(P<0.01)，同时，子代病毒滴度极显著下降(P<0.01)。结果表明，敲低SEC22B基因后显著抑制BVDV复制，本研究为BVDV防控新方法的建立提供理论依据。
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