利用细菌人工染色体技术构建整合F基因的重组MDV疫苗株

作者：朱潇静; 王芮; 张欣欣; 靳家鑫; 路闻龙; 丁大顺; 霍翠梅; 李青梅; 孙爱军^*; 庄国庆^*

来源：中国生物工程杂志, 2021, 41(10): 33-41.

DOI：10.13523/j.cb.2105047

• 细菌人工染色体
• 新城疫病毒
• F基因
• 马立克氏病毒
• 重组疫苗

目的:预防马立克氏病病毒(MDV)和新城疫病毒(NDV)混合感染鸡引起的疾病,构建表达NDV F蛋白的MDV疫苗株CVI988 BAC重组载体,并包装成重组病毒,为疫苗免疫提供更多的重组疫苗选择。方法:首先利用PCR扩增带有卡那霉素(Kanamycin,Kana)抗性基因片段的F基因,采用同源重组的方法将其整合到CVI988 BAC上,进一步诱导I-SceI表达敲除Kana基因而获得重组质粒CVI988 BAC-F。通过磷酸钙法转染鸡胚成纤维细胞获得重组病毒。结果:Western blot和间接免疫荧光实验证实重组病毒能够表达F蛋白。病毒生长曲线和蚀斑大小测定结果表明,F基因的插入不影响病毒的体外增殖。结论:利用BAC技术成功构建了整合F基因的重组MDV病毒CVI988 BAC-F,为MDV重组疫苗研发,防控NDV与MDV共感染奠定了基础。

• 单位
  河南省农业科学院; 河南农业大学