USP22 aiRNA通过Mdm2-p53通路抑制膀胱癌耐药细胞株T24/MMC的增殖

作者：吕磊; 袁敬东; 黄韬; 吴维; 黄遂斌; 章传华

来源：华中科技大学学报(医学版), 2016, 45(06): 597-612.

• 膀胱肿瘤
• 耐药
• 泛素特异肽酶22
• 细胞增殖
• 基因表达调控

目的研究沉默泛素特异肽酶22(USP22)基因对膀胱癌T24丝裂霉素C(mitomycin C,MMC)耐药细胞株(T24/MMC)生长活性的影响,并探讨其可能的作用机制。方法采用MTT法检测不同浓度的MMC(20、40、80、160、320μg/mL)对T24和T24/MMC细胞生长活性的影响。实时荧光定量PCR和Western blot法检测人膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1细胞株、T24和T24/MMC细胞中USP22mRNA和蛋白的表达水平。采用非对称性小RNA(aiRNA)干扰技术沉默USP22,MTT法和吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)双重染色法分别检测沉默USP22后MMC对T24细胞、T24/MMC细胞生长活性和凋亡的影响。实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测p53和Mdm2mRNA和蛋白的表达水平。结果采用不同浓度的MMC(20、40、80、160、320μg/mL)处理细胞24h后,T24细胞的生长活性分别为82.4%、68.7%、44.2%、25.4%和4.7%,与未经MMC处理组比较差异均具有统计学意义(均P<0.05)。然而,0160μg/mL的MMC对T24/MMC细胞的生长活性无明显影响。与SV-HUC-1细胞比较,USP22在T24及T24/MMC细胞中高表达,且T24/MMC细胞中USP22表达显著高于T24细胞,差异具有统计学意义(P<0.05)。沉默USP22后,MMC对T24细胞的生长活性抑制作用更显著。且当MMC浓度在20160μg/mL时,沉默USP22后T24/MMC细胞的生长活性也明显受到抑制,其生长活性分别为85.1%、70.3%、63.2%和47.8%。同时,AO/EB实验结果显示,沉默USP22后给予80μg/mL的MMC处理24h,可诱导T24及T24/MMC细胞凋亡。实时荧光定量PCR和Western blot结果进一步显示,转染USP22aiRNA 24h后,T24/MMC细胞中p53基因的mRNA和蛋白表达水平上调,Mdm2表达水平下调。结论 USP22aiRNA通过调控Mdm2-p53通路增强MMC抑制T24细胞增殖的敏感性,同时也能够逆转T24/MMC对MMC的耐药。

• 单位
  武汉市第一医院