基于巨细胞病毒启动子的三独立表达系统载体的构建和应用

作者：张华韵; 蔡欢嫦; 任静强^*

来源：中国兽医学报, 2023, 43(06): 1257-1262.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2023.06.21

• 独立表达系统
• 荧光蛋白
• 负链RNA病毒
• 启动子

利用巨细胞病毒(cytomegalovirus, CMV)启动子，以pUC57质粒为骨架，设计了一种多启动子的三独立表达框载体pCMV-3MCS。为验证所构建的质粒系统，在3个表达框中依次插入绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)、红色荧光蛋白(mCherry)、蓝色荧光蛋白(blue fluorescent protein, BFP),转染293细胞后，在荧光显微镜下可观察到明显的绿、红、蓝三色荧光。为更广泛的应用所设计的表达系统，将犬瘟热病毒(canine distemper virus, CDV)的N、P和L基因依次插入表达框中，与携带EGFP的病毒mini基因组(EGFP反向插入mini基因组)共转染后，可观察到明显的荧光。结果表明，利用pCMV-3MCS载体可以使N、P、L蛋白通过单质粒转染实现各自蛋白表达，可以容纳近10 kb的外源基因插入，且功能不受影响。这为多质粒共转染转变为单质粒转染提供参考，也为进一步提高副黏病毒的拯救效率提供新的思路。

• 单位
  温州大学; 中国农业科学院特产研究所