抑制SGLT对软脂酸诱导的内皮细胞损伤影响研究

作者：李春盈; 苏悦; 陈霞; 何航辉; 郑超^*

来源：浙江医学, 2020, 42(20): 2146-2151.

DOI：10.12056/j.issn.1006-2785.2020.42.20.2020-260

• 胰岛素抵抗
• 钠葡萄糖共转运体
• 根皮苷
• 一氧化氮
• 内皮细胞功能

目的探讨采用软脂酸(PA)诱导人脐静脉内皮细胞胰岛素抵抗下,钠葡萄糖共转运体(SGLT)的表达变化,及抑制SGLT表达后对内皮细胞损伤的影响和作用机制。方法将人脐静脉内皮细胞分为空白对照组(DMSO组)、PA组、PA+Insulin组、PA+根皮苷(PH)组、PA+PH+LY组。DMSO组细胞加入DMSO处理,作对照用;PA组用0.3 mmol/L PA干预18 h建立胰岛素抵抗模型;PA+Insulin组、PA+PH组在PA组处理的基础上再分别给予100 nmol/L胰岛素、PH干预30 min;PA+PH+LY组预先加入100 nmol/L磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)抑制剂LY294002孵育30 min,后再加入PH干预30 min。采用Western blot法检测各组细胞SGLT1、SGLT2、磷酸化胰岛素受体底物1(p-IRS-1)、磷酸化AKT(p-AKT)、磷酸化eN OS(p-eN OS)蛋白表达水平,采用RT-PCR法检测SGLT1、SGLT2 mR NA表达水平,采用硝酸盐还原酶法检测NO浓度和葡萄糖消耗量。采用si RNA转染内皮细胞以沉默SGLT1和SGLT2,分为DMSO组、PA组和PA+si-Ctrl组、PA+si-SGLT1组、PA+si-SGLT2组,其中PA+si-Ctrl组细胞用无意义片段转染,采用Western blot法检测p-IRS-1、p-AKT、p-eN OS蛋白表达水平。结果 PA组细胞SGLT1、SGLT2蛋白和mR NA表达水平较DMSO组增加(均P<0.05),PA+PH组细胞SGLT1、SGLT2蛋白和mR NA表达水平较PA组降低(均P<0.05)。PA组细胞葡萄糖消耗量与NO浓度均低于DMSO组(均P<0.05),PA+Insulin组、PA+PH组细胞葡萄糖消耗量与NO浓度均高于PA组(均P<0.05)。PA组细胞p-IRS-1、p-AKT、p-eN OS蛋白表达水平及NO浓度均低于DMSO组(均P<0.05)。PA+PH组细胞p-AKT、p-eN OS蛋白表达水平及NO浓度均较PA组升高(均P<0.05),但p-IRS-1蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。PA+PH+LY组细胞p-AKT、p-eN OS蛋白表达水平均较PA+PH组降低(均P<0.05),但p-IRS-1蛋白表达水平及NO浓度比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。PA+si-SGLT1组、PA+si-SGLT2组细胞p-AKT、p-eN OS蛋白表达水平均明显高于PA组和PA+si-Ctrl组(均P<0.05)。与DMSO组相比,p-IRS-1在PA组、PA+si-Ctrl组和PA+si-SGLT1组、PA+si-SGLT2组明显下调,但组间比较均无统计学差异(均P>0.05)。结论 PA可增加SGLT在内皮细胞的表达;抑制SGLT可激活PI3K/AKT/eN OS通路,使NO的释放增加,从而改善胰岛素抵抗下的内皮细胞损伤。

• 单位
  浙江大学医学院附属第二医院; 温州医科大学