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摘要
目的 观察m6A甲基转移酶KIAA1429转染对结肠癌细胞增殖的影响，并探讨其机制。方法 通过慢病毒转染的方法在人结肠癌细胞RKO中构建稳定敲低KIAA1429的对照组和实验组细胞系，将其分别命名为sh-NC组、shKIAA1429组，在人结肠癌细胞LS180中构建稳定过表达KIAA1429的对照组和实验组细胞系，将其分别命名为OE-NC组、OE-KIAA1429组。采用Western blotting法检测KIAA1429蛋白来验证转染效率，采用CCK-8实验和平板克隆实验检测KIAA1429转染对结肠癌细胞增殖的影响，通过差异基因的富集分析预测KIAA1429转染对结肠癌细胞增殖的影响机制，采用流式细胞术检测KIAA1429转染对细胞周期的影响，采用Western blotting法观察OE-NC组和OE-KIAA1429组细胞内E2F1、CyclinB1、p21蛋白变化。结果 sh-NC组、sh-KIAA1429组KIAA1429蛋白相对表达量分别为0.979±0.028、0.299±0.138，两组比较P=0.002;OE-NC组、OE-KIAA1429组KIAA1429蛋白相对表达量分别为0.446±0.104、0.899±0.153，两组比较P=0.026。CCK-8实验和平板克隆实验结果显示，KIAA1429显著促进了结肠癌细胞的增殖（P均<0.05）。KEGG富集分析提示差异基因主要于细胞周期相关的信号通路得到富集，GO富集分析提示差异基因的功能与遗传物质的复制及细胞周期相关。流式细胞术结果显示，RKO细胞中sh-NC组和sh-KIAA1429组的G0/G1期所占百分比分别为52.07%±1.00%、58.57%±0.98%，两组相比P=0.003;LS180细胞中OE-NC组和OE-KIAA1429组的G0/G1期所占百分比分别为68.37%±0.82%、62.40%±1.34%，两组相比P=0.006。OE-NC组CyclinB1、E2F1、p21蛋白相对表达量分别为0.491±0.116、0.661±0.132、1.007±0.058,OE-KIAA1429组分别为1.254±0.169、1.125±0.135、0.725±0.110，两组相比P均<0.05。结论 m6A甲基转移酶KIAA1429通过调控细胞周期信号通路进而促进结肠癌细胞增殖。
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