源于C57BL/6小鼠的原代破骨细胞氯化钴模拟低氧模型的建立

作者：张玲玲; 金昱彤; 禹博; 高丹丹; 王越; 金鑫; 郭巧云^*

来源：武警后勤学院学报(医学版), 2020, 29(11): 1-5.

DOI：10.16548/j.2095-3720.2020.11.001

• C57BL/6小鼠骨髓来源巨噬细胞
• 原代破骨细胞
• 低氧
• 低氧诱导因子
• 氯化钴

【目的】探索C57BL/6小鼠骨髓来源的原代破骨细胞氯化钴诱导的低氧模型的建立方法。【方法】提取4～6周龄雄性C57BL/6小鼠股骨及胫骨骨髓细胞,通过流式细胞术鉴定单核巨噬细胞(bone marrow-derived mononuclear macrophages,BMMs)表面标记物;BMMs经巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)和核刺激因子-κB受体配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)诱导4 d后,采用抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色法观察BMMs向原代破骨细胞诱导分化情况;利用MTT法确定氯化钴(cobalt chloride,CoCl2)模拟原代破骨细胞低氧浓度;运用Western blotting技术检测原代破骨细胞低氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)蛋白表达量。【结果】BMMs簇分化抗原11b(cluster differentiation 11b,CD11b)呈强阳性,阳性率为97.90%;BMMs经过M-CSF和RANKL诱导后,产生了大量破骨细胞,TRAP染色为阳性;MTT和Western blotting技术确定原代破骨细胞CoCl2模拟低氧最相似浓度为50μmol/L。【结论】本研究成功地将BMMs诱导分化为破骨细胞,采用50μmol/L的CoCl2可建立该原代破骨细胞的低氧模型。

• 单位
  天津医科大学; 天津中医药大学; 武警后勤学院; 天津医学高等专科学校