杜氏盐藻类驱动蛋白钙调素结合蛋白马达区的表达与纯化

作者：徐朋奇; 李杰; 张红梅; 石科; 韩康; 李梅; 薛乐勋

来源：郑州大学学报(医学版), 2011, (06): 831-835.

DOI：10.13705/j.issn.1671-6825.2011.06.004

• 杜氏盐藻
• 类驱动蛋白钙调素结合蛋白
• 纯化 Dunaliella salina
• kinesin-like calmodulin-binding protein
• purification

目的:构建杜氏盐藻类驱动蛋白钙调素结合蛋白马达区(KMD)基因原核表达载体并表达纯化KMD。方法:通过软件和在线工具预测KMD的理化性质。构建KMD的原核表达载体pET28a-KMD,而后在大肠杆菌BL21(DE3)内16℃过夜诱导表达KMD,通过超声破碎菌体和高速离心,将上清液进行亲和层析,获得粗纯目的蛋白,再利用离子交换层析和凝胶过滤层析进一步纯化。SDS-PAGE检测层析各阶段蛋白样品。将纯化后的KMD均分3份分别放置在-80℃、4℃和18℃环境中,1周后SDS-PAGE检测目的蛋白是否降解。结果:KMD相对分子质量为37480,预测pI为7.99。基因中含有的稀有密码子不会明显影响其在...

• 单位
  郑州大学; 中国科学院生物物理研究所; 生物大分子国家重点实验室