利用实时荧光定量PCR技术检测毒素基因快速鉴定A/B型肉毒梭菌方法的建立

作者：黄英; 史芸; 叶长芸; 徐雪芳^*

来源：疾病监测, 2019, 34(09): 844-848.

DOI：10.3784/j.issn.1003-9961.2019.09.015

• A/B型肉毒梭菌
• 实时荧光定量PCR
• 特异性
• 灵敏性

目的建立针对A/B型肉毒梭菌毒素基因的实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测方法,构建标准曲线,评价该方法的特异性、敏感性及检测下限,以提高肉毒梭菌检测的快速性、准确性。方法根据肉毒梭菌A/B型毒素基因设计特异性引物及探针,优化反应条件,建立real-time PCR反应体系。用25种细菌评价该方法的特异性,使用含有A/B型毒素基因特异性序列的重组质粒标准品构建标准曲线,模拟粪便标本,评价建立方法的灵敏度。结果建立的real-time PCR检测方法特异性好,携带A/B型毒素基因的重组质粒均出现相应特异性扩增曲线,对其他25种细菌进行试验扩增时,均未见出现特异性扩增曲线。根据重组质粒标准品构建的标准曲线可确定其对肉毒梭菌A/B型毒素基因检测灵敏度分别为5. 0 4×1 0 2拷贝/μl和6.91×102拷贝/μl。模拟粪便标本中含有目的基因重组质粒的检测下限为A型1.71×103拷贝/μl,B型2.14×103拷贝/μl。结论本研究设计了适合检测国内肉毒梭菌A/B型的引物和探针,建立real-time PCR快速检测体系,为我国肉毒梭菌A/B型菌株的快速鉴定提供一种新的技术手段。

• 单位
  中国疾病预防控制中心传染病预防控制所; 北京化工大学; 传染病预防控制国家重点实验室