目的 将四倍体胚胎补偿技术与转基因相结合,构建基因打靶载体转化的胚胎干细胞(ESCs),获得小概率的同源重组事件,进而直接得到所要的突变品系. 方法 通过电穿孔的方法将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达质粒转入ESCs,用G418筛选获得EGFP-ESCs.另外,通过电融合获得四倍体囊胚细胞,显微注射法将19~21个EGFP-ESCs注入每个四倍体囊胚腔,分别移植到假孕2.5d雌鼠子宫或假孕