小鼠TIM-3原核表达载体的建立及多克隆抗体的制备与鉴定

作者：马德强; 郝友华; 刘敏; 徐春利; 郭艳; 陈悦; 陆孟吉; 杨东亮

来源：中国免疫学杂志, 2011, (02): 158-162.

• TIM-3
• 蛋白
• 多克隆抗体 TIM-3
• Protein
• Olyclonal antibody

目的:克隆小鼠TIM-3基因,构建原核表达载体,制备相应的多克隆抗体并初步鉴定。方法:以小鼠脾细胞总RNA为模板,用RT-PCR方法,扩增得到TIM-3基因编码区,构建pRSET-B-TIM-3原核表达载体;经IPTG诱导表达并纯化重组蛋白;然后常规免疫家兔,制备多克隆抗体;用ELISA方法检测抗体的效价,用Western blot、免疫组化、流式细胞术检测抗体的特异性。结果:成功构建的原核表达载体pRSET-B-TIM-3在大肠杆菌中诱导后可以高效表达TIM-3蛋白;免疫获得的多克隆抗体经过ELISA检测,抗体效价为1∶320 000,经Western blot、免疫组化和流式细胞术等鉴定,...

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属同济医院; 十堰市太和医院; 湖北医药学院