重组人胰岛淀粉样多肽的制备及评价

作者：李欣宇; 张杰; 刘路馨; 陆仲夏; 王盛楠; 路新枝^*

来源：中国生物化学与分子生物学报, 2023, 39(10): 1468-1475.

DOI：10.13865/j.cnki.cjbmb.2023.08.1173

• 人胰岛淀粉样多肽(hIAPP)
• 蛛丝蛋白
• 淀粉样变
• 重组表达

人胰岛淀粉样多肽(hIAPP)的淀粉样变与2型糖尿病(T2D)的发生发展密切相关。为解决体外评价化合物抗hIAPP淀粉样变活性所需hIAPP存在化学合成困难、成本高、溶解性低和批次稳定性差等问题，本研究以蛛丝蛋白N端结构域突变体NT*作为融合标签，构建大肠杆菌高效表达hIAPP体系。通过优化表达条件和分离纯化工艺，获得重组hIAPP(rhIAPP),并对rhIAPP二硫键形成、淀粉样变能力和淀粉样变产物的毒性进行检测。融合蛋白质以包涵体形式存在，经过尿素变性和亲和层析纯化得到融合蛋白质产量为70 mg/L发酵液，融合蛋白质经过复性、凝血酶切除融合标签和进一步纯化，最终得到rhIAPP产量为6 mg/L发酵液。检测显示，rhIAPP的巯基未形成二硫键。rhIAPP具有“S”型淀粉样变曲线，其形成的β-折叠结构远多于化学合成的hIAPP(chIAPP),化合物姜黄素能显著抑制2种来源hIAPP的淀粉样变。细胞毒检测表明，rhIAPP在与红细胞孵育过程中促进红细胞溶血。

• 单位
  医药学院; 中国海洋大学