黑曲霉脂肪酶:基因克隆、表达及体外复性

作者：舒正玉; 杨江科; 徐莉; 闫云君

来源：微生物学通报, 2007, 34(3): 443-446.

DOI：10.3969/j.issn.0253-2654.2007.03.011

• 黑曲霉
• 脂肪酶
• 基因克隆
• 大肠杆菌
• 大量表达
• 包涵体
• 复性

根据黑曲霉F044脂肪酶N-端氨基酸序列,运用生物信息学方法,找到与黑曲霉脂肪酶基因同源的候选基因A84689.根据该基因序列,设计引物直接PCR扩增得到黑曲霉脂肪酶全长基因anl.anl全长1 044bp,含3个内含子,编码297个氨基酸(含信号肽27个氨基酸),与其它脂肪酶基因没有明显同源性.将编码成熟脂肪酶的anl连接到pET28a载体上得到重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(De3),诱导表达并纯化出目的蛋白.通过大量稀释和DEAE Sepharose Fast Flow层析相结合的方法,变性后的纯化蛋白在体外实现再折叠复性.

• 单位
  华中科技大学; 生命科学技术学院