大花杓兰钙依赖蛋白激酶基因克隆及植物表达载体构建

作者：付亚娟; 侯荟玲; 乔洁; 耿晓进; 王聪艳; 侯晓强^*

来源：植物遗传资源学报, 2019, 20(06): 1613-1620.

DOI：10.13430/j.cnki.jpgr.20190329002

• 大花杓兰
• 钙依赖蛋白激酶
• RT-PCR
• RACE
• 植物表达载体

RT-PCR结合RACE技术,克隆到1个全长2079 bp的大花杓兰钙依赖蛋白激酶基因CmCDPK,cDNA为1491 bp,编码496个氨基酸。CmCDPK是1个具有CDPKs典型的Ser/Thr蛋白激酶保守结构域、含1个跨膜结构域、无信号肽、稳定的亲水性蛋白。CmCDPK二级结构主要由α-螺旋和无规卷曲构成。相对于其他植物CDPKs,CmCDPK与小兰屿蝴蝶兰和铁皮石斛的亲缘关系更近。通过DNA重组技术将CmCDPK片段克隆到pBI121质粒上。PCR、酶切及DNA测序的结果表明,重组质粒pBI-CmCDPK包含1个1491 bp的CmCDPK片段,且核苷酸序列及插入方向完全正确。本研究首次克隆了大花杓兰CmCDPK基因,并成功构建了植物过表达载体pBI-CmCDPK,为CmCDPK基因在烟草中实现遗传转化和功能研究奠定基础。

• 单位
  生命科学学院; 廊坊师范学院